文章目录
一、酶免法是什么二、酶联免疫吸附法的方法类型和操作步骤三、酶联免疫吸附测定法是什么
什么是酶免疫测定
1.什么是酶免疫测定
1971年，瑞典学者和荷兰学者分别报道了免疫技术发展成为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法。Elisa现已成为分析化学领域的一个前沿课题。它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术基础上发展起来的一种新的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验，简称elisa。它的中心是将抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测它。
2.酶免疫分析的基本原理
2.1 .将抗原或抗体结合到固体载体表面并保持其免疫活性。
2.2 .将抗原或抗体与酶连接形成酶标记的抗原或抗体，该抗原或抗体保持其免疫活性和酶活性。在测定过程中，被测样品和酶标记的抗原或抗体按照不同的步骤与固体载体表面的抗原或抗体反应。固相载体上形成的抗原抗体复合物通过洗涤与其他物质分离，最后固相载体上结合的酶的量与样品中被测物质的量成比例。
3.酶免疫分析的优缺点
3.1 .优点:高灵敏度，由于酶的高催化效率，间接放大免疫反应的结果。例如白细胞介素5，双抗体夹心酶联免疫法的测定限低至7.8皮克/毫升，比使用小鼠bcl1细胞的生物测定法灵敏10，000倍。特异性更高，由于抗原抗体反应的应用，与生物测定法相比，特异性更高。操作简单，速度快，无同位素，无辐射源，适合批量加工。试剂使用寿命长。
3.2 .缺点:该方法测量待测蛋白质多肽的免疫活性而不是生物活性。这种方法不能对蛋白质多肽进行阳性鉴定，如准确的生化成分和序列。它容易受到多种因素的干扰:一种形式的干扰来自代谢物，如果代谢物在原型药物的免疫测定中具有交叉反应性，则代谢物会显著干扰生物利用度的测定；另一种干扰来自抗体的形成，这在临床前研究中尤为突出，因为施用的人蛋白显然是动物外源性的。这些抗体可以是中性或非中性的，它们可以影响蛋白质多肽药物的清除和药理作用，并影响它们的定量测定。
酶联免疫吸附试验的类型和操作步骤
Elisa可用于抗原和抗体的测定。该方法适用于细胞培养上清液、血清、血浆和组织液中样品的测定。干扰很小，可以测量每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)水平。在这种分析中有三种必需的试剂:固相抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和酶作用底物。根据试剂的来源、样品的特性和检测条件，可以设计各种类型的检测方法。
双抗体夹心法是最常用的抗原检测方法，操作步骤如下:将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体；洗涤以除去未结合的抗体和杂质。用脱脂奶粉或牛血清白蛋白密封。洗涤除去多余的脱脂奶粉或牛血清白蛋白。加入被测样品:使其与固相抗体反应一段时间，使样品中的抗原与固相载体上的抗体结合形成固相抗原复合物。洗涤以除去其他未结合的物质。加入酶标抗体:将固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底清洗未结合的酶标记抗体。此时，固相载体上携带的酶的量与样品中被测物质的量正相关。
什么是酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验(elisa)利用抗原和抗体的特异性反应将待测物质与酶连接起来，然后在酶和底物之间产生颜色反应进行定量测定。待测对象可以是抗体或抗原。测定方法中必需的试剂包括:固相抗原或抗体(免疫吸附剂)、酶标记抗原或抗体(标记物)和酶作用底物(显影剂)。
在测量过程中，抗原(抗体)首先与固相载体结合，但仍保持其免疫活性，然后加入通过抗体(抗原)与酶结合形成的缀合物(标记物)，其仍保持其原始免疫活性和酶活性。当缀合物与固相载体上的抗原(抗体)反应，然后加入相应的酶底物时，它将催化水解或氧化还原反应并呈现颜色。生成的颜色深度与待测抗原(抗体)含量成比例。这种有色产品可以用肉眼、光学显微镜和电子显微镜观察，也可以用分光光度计(微孔板阅读器)测量。该方法简便、快速、特异。